| La eletrforesis se basa en la migracion de de iones en un campo electrico, es ampliamente utilizada para la separcion analitica de moleculas biologicas. la migracion dependera de el campo electrico, la carga de la molecula, su tamaño, forma y estado de solvatacion, ademas de la viscosidad de la solucion. Asi las fuerza involucradas en la migracion son la fuerza electrica determinada por el campo electrico y la carga de la molecula, y la fuerza de friccion determinda por la velocidad de migracion del ion y el coeficiente de friccion, el que depende de los demas factores ya mencionados. |
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En Papel
| En la electroforesis en papel, la muestra es aplicada sobre una tira de papel filtro y sus extremos son sumergidos en recipientes diferentes que contiene el tampon y a los cuales se conectan los electrodos. los iones migran al electrodo de carga opuesta. Esta tecnica puede ser combinada con la cromatografia en papel, separandolos de acuerdo a su carga y a su polaridad. Tambien se puede realizar una electroforesis en dos dimensiones en la cual se usan buffer con diferente pH para cada dimension. |
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Gel De Electroforesis
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La electroforesis en gel
es quizas la mas poderosa y convencionalmemte usada tecnica utilizada para
la separacion de macromoleculas. Los geles mas comunes son de poliacrilamida
y agarosa, que tienen poros con dimensiones que pueden ser determinadas. Asi
la separcion esta basada tanto en la filtracion en gel como en las
mobilidades electroforeticas de las moleculas a ser separadas.
En el la electroforisi en gel de poliacrilamida (PAGE), el gel esta compuesto por acrilamida y bisacrilamida y un buffer a eleccion. la polimerizacion de estos compuestos va a dar forma al gel y su tamaño de poro dependera de la concentracion de estos. Los extremos del gel son sumergidos en recipientes separados que cuentan con un mismo tampon, con pH cercano a 9 para proteinas. los geles de agarosa son utilizados para la separacion de macromoleculs ed gran tamaño que no pueden ser rsueltas por PAGE, normalmente son utilizados para la separacion de acidos nucleicos (DNA, RNA). Las Bandas pueden ser detectadas por tincion, marcacion radioactiva o deteccion con anticuerpos (Inmunoblotting o Weatern blot). Para proteinas normalmente se utiliza Azul de Coomassie, tambien pueden ser utilizados compuestos fluoescentes cuando las cantidades de proteinas son menores. |
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Sds-Page
| El SDS (dodecil sulfato de sodio) es un detergente que denatura fuertemente las proteinas y es usado comunmente en preparaciones bioquimicas. El SDS, una molecula cargada negativamente, es capaz de rodear completamente una proteina enmascarndo su carga, lo que permite que las proteinas tengan una identica relacion de masa/carga y similar forma. Debido a esto, la electroforesis en SDS-PAGE, la separcion de las proteinas ocurre de acierdo a su peso molecular. |
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Isoelectroenfoque
| Esta electroforesis se basa en el pI d las proteinas, pH al cual las proteinas no tiene movilidad en un campo electrico.Aqui la proteina se encuentra en una gradiente estable de pH, en la cual el pH incrementa levemnete desde el anodo al catodo, y las proteinas migran a la posicion en que el pH es igual a su pI. En el isoelectroenfoque, los extremos del gel estan sumergidos en recipientes con tampones de distinto pH, uno acido y otro basico, los que van a producir la gradiente. En esta tecnica la muestra es agregada antes de la polimerizacion del gel. |
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Electroforesis Capilar
| En esta tecnica, la electroforesis es llevada a cabo en unos muy delgados capilares. Su uso es relativamente comun y es altamente efectivo, sin embargo requiere de muchas horas y es un proceso en el cual la cuantificacion y automatizacion se hace dificil. su uso es limitado a pequeñas cantidades y para fines analiticos. |
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